一、原理 

超薄切片实际上是样品的二维切片，不能表达细胞的三维结构，而且在观察 切片后所拍摄的显微照片时，容易造成错误的印象，用扫描电子显微镜(SEM)能 直接观察标本表面的三维空间结构，真实地反映各种细胞表面和断裂面的形态特 征。扫描电镜细胞样品的预处理包括取材、固定、脱水等。

二、操作基本步骤

1、取材 块状样品，要求在不影响实验目的的前提下，观察面尽量平整，尺寸为厚 2~3 毫米、长宽 5~6 毫米。有正反之分的，要能够视觉区分，不能区分要在形状上做 标记。 细胞样品，要求在细胞爬片上做样，玻璃片宽 3 毫米长 5 毫米，右上角切掉 以表正面。 细菌样品要求同上。不需要原位观察的，或者自己制备样品的，可以直接用 菌液制备样品，注意离心后需要混匀。

2、固定 将培养好的细胞经 800-1500 转离心 8-15min 富集沉淀，取沉淀浸入 PBS （0.1M、不含 NaCI）中，漂洗细胞或组织数次，离心去上清，加 4℃预冷的 2.5- 3%戊二醛，在 4℃固定 4h 或过夜（视组织大小的需要决定时间，该步骤可以延 长）， 吸出固定剂，用 PBS（0.1M、不含 NaCI）浸洗 3-5 次，每次 15min。

3、脱水 用系列梯度酒精（30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%）脱水，每种 浓度酒精脱水 1 次，每次 10-20min （一般 15min），再用 100%酒精彻底脱水 1- 2 次，接下来用醋酸异戊酯(香蕉水)替换 2 次，每次 20min。 

4、干燥 以临界干燥法最理想，但必须要有专门的仪器临界点干燥器。当实验室不具 备此种仪器时，可采用自然干燥。

5、样品导电处理， 用真空喷镀法。喷镀应均匀，完成后扫描电镜下观察。 注:除了在固定、70%酒精、100%酒精、香蕉水处可长时间乃至过夜外，其 他遵循时间安排