主要用途

乙酰胆碱酯酶活性抑制剂筛选比色法检测试剂是一种旨在通过乙酰胆碱酯酶反应系统中，在抑制剂存在与否的情况下，所释放出巯基胆碱，与Ellman试剂反应后，产生黄色5-巯基-2-硝基苯甲酸产物，出现吸光峰值的变化，即采用比色法来评价样品酶活抑制能力的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种抑制剂筛选检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

技术背景

乙酰胆碱酯酶（Acetylcholinesterase；AchE；EC3.1.1.7），又称为红细胞胆碱酯酶（RBC cholinesterase），广泛存在于真核生物，包括某些植物，尤其在脑组织、神经肌肉连接处（neuromuscular junction）、中枢神经系统的胆碱能突触（cholinergic synapses）和红细胞膜上高度表达，催化主要的神经传导介质乙酰胆碱的水解反应，产生乙酸和胆碱，终止突触传导。其功能在于调节乙酰胆碱作用。神经毒气，例如有机磷沙林（Sarin），抑制乙酰胆碱酯酶活性，导致神经肌肉瘫痪，最终发生窒息（asphyxiation）。血清乙酰胆碱酯酶浓度显著降低与有机磷杀虫剂中毒有关，因此血液检测是环境污染的重要指标。基于人工合成底物碘化硫代乙酰胆碱（acetylthiocholine iodide），在抑制剂存在与否的情况下，通过乙酰胆碱酯酶的作用，水解产生乙酸和硫代胆碱（thiocholine），与Ellman试剂5，5-二硫基-双（2-硝基苯甲酸）[5，5’-dithiobis-（2-nitrobenzoic acid）；DTNB]反应后，产生黄色的5-巯基-2-硝基苯甲酸（5-thio-2-nitrobenzoic acid；TNB），通过其吸收峰值的变化（412nm波长），来定量分析乙酰胆碱酯酶抑制剂的效应。乙酰胆碱酯酶反应系统为：

Acetylchoinesterase

                 Acetylthioline                →      acetate   ＋   thiocholine

inhibitor

                     DTNB    +thiocholine    →TNB ＋choline-S-S-TNB

产品内容

缓冲液（Reagent A）        20 毫升

反应液（Reagent B）         2 毫升

底物液（Reagent C）              2 毫升

阴性液（Reagent D）           1 毫升

产品说明书            1份

保存方式

保存在－20℃冰箱里；反应液（Reagent B）和底物液（Reagent C）避免光照；有效保证6月

用户自备

乙酰胆碱酯酶：用于抑制剂筛选

1.5毫升离心管：用于样品操作的容器

比色皿或96孔板：用于比色的容器

分光光度仪或酶标仪：用于比色分析

实验步骤

一、 测定准备

1． 准备好待测样品，置于冰槽里备用

2． 开启并设定好分光光度仪（温度为37℃）：波长412nm，间隔5分钟，读数3次（共15分钟），并置零

3． 从－20℃冰箱里取出试剂，置于冰槽里融化；反应液（Reagent B）和底物液（Reagent C）避免光照

4． 缓冲液（Reagent A）室温下均衡温度；底物液（Reagent C）50℃温育溶解

以上为简版内容，详细纸质版随货