简要描述：油红O属于偶氮染料，是很强的脂溶剂和染脂剂，与甘油三酯结合呈小脂滴状。脂溶性染料能溶于组织和细胞中的脂类，它在脂类中的溶解度比在溶剂中大。当组织切片置入染液时，染料则离开染液而溶于组织内的脂质(如脂滴)中，使组织内的脂滴呈橘红色。

1取材及冷冻

切取组织时应使用锋利的刀、剪，切取组织块时，从刀的根部开始向后拉动切开组织。组织块的厚度约为0.2~0.3cm，大小为1.5cm×1.5cm x 0.3cm为宜。将要切取的平面朝下放到塑料包埋盒底部，在液氮表面停留约30秒把组织冻硬，注意停留太久易使组织冻裂。立即把冻硬的组织块装入自封袋中保存于-80℃低温冰箱。

2切片 

切片前将组织样本置于-20℃冰箱内复温30 min，切片厚度为5～7 μm，太厚贴片不牢固，更不利于镜下观察。包埋可用OCT,也可用胶水代替。用高粘度胶水在支撑架上滴加形成一个小台，将组织放上，在组织周围用胶水包埋一下放在冷台上冷冻。包埋使组织上、下方有一定的边，有利于连续切片，而且展片时可以避免组织皱缩。待组织达适当硬度即可切片，切片时组织的冷冻程度是切片的最关键环节，冻得过硬，切片呈碎屑状；冻得不够，切片呈粥糜状或切不成片。

3贴片和固定

载玻片必须预先处理，常用多聚赖氨酸包被。需要注意多聚赖氨酸不可反复使用，且不能用玻璃容器存放。将切片小心贴附于载玻片上，贴片时手要稳，并且手要有一个向下伸展的动作，立即将切片放入固定液中。以往的经验用吹风机吹干再固定，但完全干后的组织容易在冲洗时脱片，并且组织细胞发生退行性变；另外，可溶性抗原不能晾干，应立即固定。固定液的选择因抗原而异，但一般抗原可用4℃预冷的丙酮固定15 min，此固定剂比较温和，对抗原保存较好。

4  油红O染色步骤

（1）切片用4%甲醛固定10分钟；

（2）蒸馏水洗；

（3）60％异丙醇浸洗；

（4）油红O染液10分钟(染液可回收再利用)；

（5）60％异丙醇分色至背景无色；

（6）蒸馏水洗；

（7）Mayer苏木精复染；

（8）自来水洗(蓝化)1～3分钟；

（9）蒸馏水洗；

（10）甘油明胶封片。

5 图像采集

通过显微镜拍照，采集分析样本相关部位。