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技术背景 核小体（nucleosome）是染色质的最小结构单位，由组蛋白H2A-H2B双体和H3-H4双体构成的组蛋白八体 结构（octamer），外层涵盖146碱基DNA。其结构中组蛋白N末端为游离状态，且高度进化保留，在特定氨 基酸部位发生诸如甲基化、乙酰化、磷酸化修饰，以改变其电荷和功能。组蛋白上特定赖氨酸残基的ε氨基 基团的乙酰化通过组蛋白乙酰转移酶（Histone Acetyltransferase；HAT）催化产生，达到染色质松弛打开， 促使基因转录。其功能异常将导致肿瘤和神经退行性疾病。组蛋白乙酰转移酶家属分成五类共20多个蛋白， 包括GNAT1、MYST、TAFII250、核受体辅助激活因子（nuclear receptor co-activator）、P300/CBP（P300/cAMP Responsive Element-Binding Protein）等。其中P300/CBP 家属中包括P300、CBP、和P300/CBP 相关因子 （P300/CBP Associated Factor；PCAF），这是第一个发现的组蛋白乙酰转移酶，成为结构、机制和功能研究 的代表。PCAF不仅催化组蛋白H3和H4的乙酰化，同时也对非组蛋白，例如p53、PTEN、tubulin等乙酰化。 基于底物H3组蛋白多肽Ac-Gln-Thr-Ala-Arg-Lys-Ser-Thr-Gly-Gly-Lys-Ala-Pro-Arg-Lys-Gln-Leu-Ala-Thr- Lys-NH2（H3组蛋白N末端5至23氨基酸残基）是大多数组蛋白乙酰转移酶成员，例如Gcn5、PCAF、TAFII250、 P300/CBP和SRC-1/ACTR等的底物，通过其作用下，将乙酰辅酶A上的乙酰基团，转移到多肽分子上，由此 产生乙酰化多肽和巯基辅酶A（CoA-SH），终止反应后，与巯基荧光探针7-二乙基胺基马来酰亚胺苯基甲基 香豆素（7-diethylamino-3-（4-maleimidylphenyl）-methylcoumarin；CPM）反应，产生高度荧光产物，在荧 光分光光度仪下检测（激发波长360-390nm，散发波长450-470nm），来定量测定组蛋白乙酰转移酶的总活 性。其反应系统为：

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HL10068.1 v.A  动物肝星状细胞分离培养试剂盒产品说明书.pdf